一、非洲豬瘟變異株的定義

非洲豬瘟變異株包括基因缺失株、自(zì)然變異株、自(zì)然弱毒株等，與2018年(nián)傳入的非洲豬瘟毒株相(xiàng)比，該類毒株的基因組序列、緻病力等發生(shēng)明顯變化。生(shēng)豬感染該類毒株後，潛伏期延長，臨床表現輕微，後期可(kě)出現關節腫脹、皮膚出血型壞死竈，感染母豬産仔性能下降、死淘率增高，出現流産死胎/木乃伊胎等。與傳統的流行毒株相(xiàng)比，生(shēng)豬感染該類毒株後排毒滴度低、間隙性排毒，難以早期發現。

二、監測方法

（一）加強臨床巡視

時刻關注豬場各個環節豬隻異常情況，想方設法提升飼養人(rén)員(yuán)責任心，一旦發現豬隻出現嗜睡、輕觸不起、采食量減少，發熱(rè)、皮膚發紅(hóng)、關節腫脹/壞死、咳喘、腹式呼吸，育肥豬死淘率增高，母豬流産或出現死胎/木乃伊胎等可(kě)疑臨床表現時，應第一時間采樣檢測。

（二）改進主動監測

每周對豬群進行病原和抗體(tǐ)檢測。在豬群進行疫苗接種、轉群、去(qù)勢，或母豬分(fēn)娩後，應進行采樣檢測。豬場出現風(fēng)險暴露或周邊豬場出現感染時，按需進行采樣檢測。

（三）抽樣策略

對可(kě)疑豬的同舍和關聯舍豬群，采集深部咽拭子和抗凝血，進行病原檢測，必要時采集血清進行抗體(tǐ)檢測。對可(kě)疑豬及臨近豬接觸的地面、欄杆，以及舍内人(rén)員(yuán)接觸的物品等，采集環境樣品進行病原檢測。病原檢測如(rú)果混檢，建議(yì)混樣數量不超過5個；抗體(tǐ)檢測不得(de)混樣。

（四）樣品選擇

1. 對可(kě)疑豬，按檢出概率高低排序，依次采集深部咽拭子、前腔靜(jìng)脈抗凝血（EDTA）或尾根血、口鼻拭子。

2. 對分(fēn)娩母豬，應采集臍帶血、胎衣；對死胎和流産胎兒，應采集淋巴結、脾髒等組織樣品。

3. 對病死豬，優選采集部位爲淋巴結、脾髒、骨髓和肺髒。

4. 血清樣本，按常規方法制備。

三、檢測方法及配套

（一）采樣

豬場用戶在進行環境樣監測或者群體(tǐ)普查時，可(kě)在采樣時使用快(kuài)靈的軟拭子和多腔體(tǐ)病毒采樣管進行高效采樣及混樣。

軟拭子頭部具有彈性，彈性絨毛拭子頭較容易彎曲來(lái)适應豬場不同的異性部位，增大(dà)采樣接觸面積，其面積比普通紡錘形拭子多2-3倍，能更多采集目标樣品。

多腔體(tǐ)采樣管不同于市面上傳統的采樣管，其内部結構分(fēn)别爲洗滌腔及擠存腔，洗滌腔體(tǐ)内設有多個豎向刮擦片，對進入腔體(tǐ)中旋轉的拭子進行接觸刮擦，幫助絨毛表面的樣品洗脫釋放(fàng)。多個擠存錢腔可(kě)以最多十根軟拭子，釋放(fàng)了樣本後将拭子插入洗滌腔上部的擠壓腔，可(kě)将彈性植絨拭子吸附的洗脫液擠壓出來(lái)并從(cóng)縫隙部位回流到洗滌腔。相(xiàng)比傳統采樣管，僅用少于1/5容積的液體(tǐ)就(jiù)能充分(fēn)對拭子樣品進行洗滌，能直接提高采樣溶液病原濃度達5-6倍。

（二）病原檢測方法

原則上參照(zhào)“農辦牧〔2020〕39号”附件(jiàn)《非洲豬瘟病毒流行株與基因缺失株鑒别檢測規範》。

對采集的樣本進行核酸提取，可(kě)選用快(kuài)靈的手動柱法提取試劑盒，樣本量太大(dà)可(kě)使用快(kuài)靈磁珠提取試劑盒。

擴增時建議(yì)選用快(kuài)靈ASFV流行株/基因缺失變異株鑒别試劑盒，即P72/MGF/CD2V鑒别試劑盒（下稱鑒别試劑盒），爲了适配不同客戶的不同儀器，快(kuài)靈鑒别試劑盒在标準試劑盒的基礎上進行部分(fēn)優化，僅涉及檢測項目，試劑盒靈敏度、特異性等基本功能保持一緻，方便客戶根據不同的需求進行選擇。不同試劑盒性能見(jiàn)表1：

表1：不同鑒别試劑盒性能說(shuō)明

（三）抗體(tǐ)檢測方法  采用間接ELISA、阻斷ELISA等方法檢測抗體(tǐ)水平，詳見(jiàn)《非洲豬瘟診斷技術(shù)》（GB/T 18648）

抗體(tǐ)檢測的意義對于急性疾病的爆發，病毒檢測（PCR）最有用，血清學診斷價值較低，因爲感染的豬大(dà)多數在抗體(tǐ)産生(shēng)之前死亡；非洲豬瘟變異株（包括基因缺失株、自(zì)然變異株、自(zì)然弱毒株等）的出現，生(shēng)豬感染該類毒株後，潛伏期延長，臨床表現輕微，感染該類毒株後排毒滴度低、間隙性排毒，難以早期發現，因此抗體(tǐ)檢測的作(zuò)用凸顯。如(rú)果沒有接種過疫苗，抗體(tǐ)的存在表明感染過非洲豬瘟病毒。上海快(kuài)靈非洲豬瘟病毒ELISA抗體(tǐ)檢測試劑盒（間接法）系用大(dà)腸杆菌表達的非洲豬瘟病毒P30蛋白(bái)包被酶标闆，P30蛋白(bái)是病毒的主要結構蛋白(bái)，在感染的早期表達和分(fēn)泌，可(kě)用于感染後免疫反應的的早期檢測。

ELISA抗體(tǐ)檢測原理(lǐ) ELISA試劑盒是根據固相(xiàng)酶聯免疫吸附試驗設計(jì)而成的。在本檢測過程中，樣本暴露于包被在微量闆孔内的非感染性非洲豬瘟抗原。非洲豬瘟抗體(tǐ)（如(rú)果檢測樣本中存在）則将與酶标闆上抗原結合，經洗滌除去(qù)未結合的其他(tā)成分(fēn)後；再加入酶标記物，與酶标闆上抗原抗體(tǐ)複合物發生(shēng)特異性結合；再經洗滌除去(qù)未結合的酶标記物，在孔中加TMB底物液，與酶反應形成藍色産物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體(tǐ)含量成正相(xiàng)關；加入終止液終止反應後，産物變爲黃(huáng)色；用酶标儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光(guāng)值，即可(kě)知樣品是否含有非洲豬瘟抗體(tǐ)。

上海快(kuài)靈非洲豬瘟病毒ELISA抗體(tǐ)檢測試劑盒（間接法）使用便捷、快(kuài)速、敏感性高、特異性強，是理(lǐ)想的非洲豬瘟病毒抗體(tǐ)測工(gōng)具。